himac APPLICATION
No.93 JULY 1999
エルトリエータ細胞分離システムによる培養細胞Mo7Eからの多核細胞の分離
機種：R5E形エルトリエータ細胞分離システム
エルトリエータ細胞分離システムにより巨核球系の培養細胞であるMo7Eから多核細胞を分離濃縮した例
血小板の産生とその産生細胞である巨核球の分化、増殖の機構は依然不明な点が多く、現在も様々な研究が続けられています。*1)中でも細胞の多核化は巨核球に特異的な現象であり、細胞分化、血小板産生との関連、またはその意義について研究が加えられています。*2,3)今回は、エルトリエータ細胞分離システムを用いて、巨核球の分化成熟に伴って現れる多核細胞を、巨核球系の培養細胞であるMo7Eから分離する条件を検討しました。
1. 分離前後の細胞フローサイトメトリー解析図とライトギムザ染色像
2. 分離条件
分離条件：サンプル：培養細胞Mo7E
| Fraction No. | 流量 (ml/min) |
分画量 (ml) |
細胞数 (cells) |
Polyploid cells (％) |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 20 | 200 | Dead cells | - |
| 2 | 30 | 200 | 2.5×106 | - |
| 3 | 40 | 200 | 2.6×106 | 69 |
| 4 (Stop) | 40 | 100 | 4.8×106 | 87 |
| Total | - | 700 | 9.9×106 | - |
（回転速度：2,000rpm）
結果： Fraction No.4（流量40ml/min、遠心停止後）において多核細胞を純度87%、細胞数4.8×106cells得ることができました。
3. 使用機種
遠心機 ：CR-E/Fシリーズ himac 高速冷却遠心機
ロータ ：R5E形エルトリエータロータ
チャンバ ：スタンダードチャンバ
4. References
- Kaushansky K. : N. EngI. J. Med. , 339, 746 (1998).
- Kikuchi J. , Furukawa Y. , et al. : Blood, 89, 3980 (1997).
- Komatsu N. , Kirito K. ,Furukawa Y. , Kikuchi J. ,et al. : Blood, 89, 1182 (1997).
- 本実験は自治医科大学分子病態治療研究センター・分子病態研究室・講師である古川先生との共同研究によるものです。