himac APPLICATION
No.92 JULY 1999
エルトリエータ細胞分離システムによる培養細胞Mo7Eからの細胞周期毎の分離
機種：himac R5E形 エルトリエータ細胞分離システム
エルトリエータ細胞分離システムにより巨核球系の培養細胞であるMo7Eから各細胞周期(G0/G1,S,G2/M)細胞を分離した例
血小板の産生とその産生細胞である巨核球の分化、増殖の機構は依然不明な点が多く、現在も様々な研究が続けられています。*1,2)
中でも細胞の増殖に関して、各細胞周期における増殖因子受容体の発現が異なるなど3)、細胞周期における動態の重要性が明らかになってきました。
今回は、エルトリエータ細胞分離システムを用いて、巨核球の培養細胞であるMo7Eを各細胞周期毎に分離する条件について検討しました。
1. 分離条件および結果
サンプル：培養細胞Mo7E:約2×108cells
| Fraction No. | 流量 (ml/min) |
分画量 (ml) |
細胞数 (cells) |
Polyploid cells (％) |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 15 | 200 | 9.3×106 | - |
| 2 | 20 | 200 | 5.5×107 | G0/G1 72％ |
| 3 | 25 | 200 | 4.4×107 | - |
| 4 | 30 | 200 | 2.5×107 | S 58％ |
| 5 | 35 | 200 | 1.6×107 | - |
| 6 | 40 | 200 | 1.2×107 | G2/M 63％ |
| 7(Stop) | 40 | 100 | 1.3×107 | - |
| Total | - | 1300 | 17.0×107 | - |
（回転速度：2,000rpm）
結果： Fraction No.2(Fr.2)においてG0/G1期細胞を純度72％、Fr.4においてS期を58％、Fr.6においてG2/M期を63％でそれぞれ分離できました。
2. 使用機種
遠心機 ：CR-E/Fシリーズ himac 高速冷却遠心機
ロータ ：R5E形 himac エルトリエータロータ
チャンバ ：スタンダードチャンバ
3. 分離前後の細胞フローサイトメトリー解析図
4. References
- Kaushansky K. : N. EngI. J. Med. , 339, 746 (1998).
- Kikuchi J. , Furukawa Y. , et al. : Blood, 89, 3980 (1997).
- Komatsu N. , Kirito K. ,Furukawa Y. , Kikuchi J. ,et al. : Blood, 89, 1182 (1997).
- 本実験は自治医科大学分子病態治療研究センター・分子病態研究室・講師である古川先生との共同研究によるものです。