himac APPLICATION
No.91 JULY 1999
エルトリエータ細胞分離システムによる培養細胞UT-7からの多核細胞の分離
機種:R5E形エルトリエータ細胞分離システム
エルトリエータ細胞分離システムにより巨核球系の培養細胞であるUT-7から多核細胞を分離濃縮した例
血小板の産生とその産生細胞である巨核球の分化、増殖の機構は依然不明な点が多く、現在も様々な研究が続けられています。*1)
中でも細胞の多核化は巨核球に特異的な現象であり、細胞分化、血小板産生との関連やその意義について研究が加えられています。*2)
今回は、エルトリエータ細胞分離システムを用いて、巨核球の分化成熟に伴って現れる多核細胞を、巨核球系の培養細胞であるUT-7から分離する方法について検討しました。*3)
1. 分離条件および結果
サンプル:培養細胞UT-7:3.5×107cells(Polyploid:38%)
Fraction No. | 流量 (ml/min) |
分画量 (ml) |
細胞数 (cells) |
Polyploid cells (%) |
---|---|---|---|---|
1 | 15 | 200 | Dead cells | - |
2 | 25 | 200 | 7.8×106 | 14% |
3 | 35 | 200 | 9.9×106 | 18% |
4 | 45 | 200 | 6.3×106 | 45% |
5 | 55 | 200 | 1.1×105 | 65% |
6(Stop) | 55 | 100 | 2.8×107 | 80% |
Total | - | 1100 | 2.8×107 | - |
(回転速度:2,000rpm)
結果: Fraction No.5,6(流量55ml/min、遠心停止後)において多核細胞を純度70%、細胞数1.5×106cells得ることができました。
2. 分離前後の細胞ライトギムザ染色
3. 使用機種
遠心機 :CR-E/Fシリーズ himac 高速冷却遠心機
ロータ :R5E形エルトリエータロータ
チャンバ :スタンダードチャンバ
4. References
- Kaushansky K. : N. EngI. J. Med. , 339, 746 (1998).
- Matsumura I. , et al.: Mol. Cell. Biol. , 17, 2933 (1997).
- Kikuchi J. , Furukawa Y. , et al. : Blood, 89, 3980 (1997).
- 本実験は自治医科大学分子病態治療研究センター・分子病態研究室・講師である古川先生との共同研究によるものです。