himac APPLICATION
No.85 MARCH 1997
8ml用チューブでのプラスミドDNAの分離
機種：CS－GXシリーズ分離用小形超遠心機
S80AT3形アングルロータを用いた多段ステップモードによるプラスミドDNAの分離
これまでの小形超遠心機用ロータの最大容量は5ml×8本、合計40mlでした。しかし、このたび8ml×8本、合計約64mlのS80AT3形アングルロータが開発されました。ここでは、この大容量ロータを用いてプラスミドDNAの分離を多段ステップモードを用いて行い、遠心時間の短縮化を図りました。また、8mlのシールチューブが使用できるため、チューブ１本あたり大腸菌の培養液約200ml分に相当する試料を処理することができます。（大腸菌JM109からプラスミドpUC19DNAを分離する場合。なお、分離結果の写真は培養液量150ml分に相当する試料を分離したものです）
分離結果
-
ロータ：S80AT3形アングルロータ
チューブ：8PAシールチューブ
運転方法：多段ステップモード運転
分離条件
(1) 遠心分離条件
| ロータ | 回転速度 | 遠心時間 | 温度 | 加速モード | 減速モード |
|---|---|---|---|---|---|
| S80AT3 アングルロータ |
4段ステップモード運転 | 合計12時間 | 20ºC | 9 | 7 |
(2) 使用チューブ: 8PAシールチューブ
(3) 試料調製法
プラスミドpUC19DNAなどのプラスミドDNAを含む大腸菌JM109を一夜振盪培養後、アルカリ－SDS法などにより得られたプラスミドDNAを含むTE溶液（10mM Tris－HCl,
1mM EDTA, pH8.0）を試料とします。
8PAシールチューブ１本あたり
- 試料：5.6ml
- 塩化セシウム：5.4g
- 臭化エチジウム（10mg／ml）：160μl