himac APPLICATION

No.81 MARCH 1997

小形超遠心機による血清リポタンパク質の分離

機種：CS150GX形分離用小形超遠心機

S150AT形アングルロータによるヒト血清中のリポタンパク質の分離

血清中に含まれているリポタンパク質は、脂質の代謝に密接な関係があり、高脂血症に関する研究分野で注目されています。
ここでは、最高回転速度150,000rpm、最大遠心加速度901,000×gの小形超遠心機用アングルロータを用いて、正常ヒト血清より、VLDL、LDL、HDLのリポタンパク質の分離を行いました。
比重液の調製法については文献（1）によりました。その他、文献（2）も含めて操作法等について参考としました。詳細および注意などについては当書を参照して下さい。

1. 使用機種

遠心機：CS150GX形 himac 分離用小形超遠心機
ロータ：S150AT形アングルロータ
チューブ：Cチューブ

2. 操作および分離結果

実験は目視により観察しやすいよう試料にFAT RED 7Bを添加して行いました。^*3)

(1)　VLDLの分離（ρ＜1.006g／cm³））

(2) LDLの分離（1.006g／cm³＜ρ＜1.063g／cm³）

(3) HDLの分離（1.063g／cm³＜ρ＜1.21g／cm³）

• 比重液A（1.006g／cm3）：NaCl 11.40gとEDTA－2Naを1,000mlのメスフラスコに入れ、蒸留水500mlと1N NaOH 1mlを加えて、良く混じて溶解させる。 ついで蒸留水で1,000mlとし、さらに蒸留水を3ml加える。（NaCl：0.195mol）
• 比重液B（1.182g／cm3）：NaBr 24.98gを100mlの比重液Aに加える。（NaCl：0.195mol、NaBr：2.44mol）
• 比重液C（1.478g／cm3）：NaBr 78.32gを100mlの比重液Aに加える。（NaCl：0.195mol、NaBr：7.65mol）