himac APPLICATION
No.76 MARCH 1997
アングルロータを用いた株化細胞由来RNAの分離
機種:himac 小形超遠心機CS150GX用S150ATアングルロータ
S150ATアングルロータにより株化細胞由来RNAを1.75時間で分離した例
株化細胞由来RNAの分離は、主なマニュアルではスイングロータにより一晩程度、超遠心を行う手法が一般的でした。*1)
それに対して、小形超遠心機とそのロータであるRP120ATアングルロータの応用により、RNA分離の遠心時間を2.5時間まで短縮できることを示してきました。*2)
そして、今回、新たに開発された最高150,000rpmまで回転できる小形超遠心機CS150GXにより、この遠心時間のさらなる迅速化を検討しました。その結果、遠心時間をこれまでの2.5時間から1.75時間まで迅速化することができました。
また、得られたRNAの電気泳動やRT-PCRの実験結果から、従来と同等の分離が可能なことが示されました。
1. 実験結果
2. 実験方法
(1) 遠心条件
ロータ | 回転速度 | 遠心時間 | 温度 | Accel. | Decel. |
---|---|---|---|---|---|
S150AT アングルロータ |
150,000rpm | 1.75時間 | 20ºC | 5 | 7 |
(2) チューブ:2PAシールチューブ
(3) 実験方法
- Cell pellet(5~10×106 cells)
- 4M GTC 1~1.5ml, Vortex
- 5.3M CsCl sol※ 0.8ml上に重層
- 超遠心分離
- Bufferに溶かしエタノール沈殿
- 5.7M CsClでは遠心中に結晶が析出し、RNAを分離できない場合があります。
(参考文献)
- Sambrook J., et al. : Molecular Cloning : Cold Spring Harbor Laboratory (1989).
- himac APPLICATION No. 40(1992).
- himac APPLICATION No. 79(1997).