himac APPLICATION
No.62 APRIL 1994
ホウレンソウの葉緑体からS100AT5アングルロータを用いて葉緑体のDNAを分離した例
機種：小形超遠心機CS－FXシリーズ S100AT5アングルロータ
細胞中に存在するいろいろな種類の細胞内小器官（オルガネラ）の中でも葉緑体やミトコンドリア中には染色体DNAとは独立したDNAが存在することが知られています。
ここではホウレンソウを試料とし、その葉緑体が持つDNAを小形超遠心機を用いて分離しました。
小形超遠心機CS－FXシリーズにチューブ容量5mlのS100AT5アングルロータを用い、葉緑体由来のDNAを塩化セシウム溶液の沈降平衡法によりオーバーナイト運転で分離しました。
分離結果
実験条件
(1) 遠心分離条件
| 遠心機 | ロータ | 回転速度 | 遠心時間 | 温度 | Accel. | Decel. |
|---|---|---|---|---|---|---|
| CS120FX | S100AT5 アングルロータ |
70,000rpm | 16時間 | 20ºC | 9 | 7 |
(2) 使用チューブ: 5PAシールチューブ
(3) 試料調製法*1)
-
- bufferＡ： 0.35Mソルビトール，50mM Tris－HCl（pH8.0），25mM EDTA
- bufferＢ： 5％（W/V）N-ラウロイルサルコシン酸ナトリウム，50mM Tris－HCl（pH8.0），25mM EDTA
（参考文献）
- METHODS IN ENZYMOLOGY，118，167-186（1986）．