himac APPLICATION

No.61 APRIL 1994

40ml用チューブが使用できるスイングロータを用いてホウレンソウの葉緑体を分離した例

機種：HG30形ホモジナイザ  分離用超遠心機CP－α / βシリーズ

細胞内小器官であるオルガネラの分離には、効率の良い細胞の破砕と迅速な遠心分離が必要となります。ここではオルガネラとしてホウレンソウの葉緑体をとりあげ、最終的にはこの葉緑体からDNA を分離することを目的として実験しました。
HG30形ホモジナイザにC20形カッタを用い、約10秒間の運転で破砕できました。また、遠心分離に は40mlチューブが使用できるP28Sスイングロータを用いることにより、チューブ1本あたり約40gの ホウレンソウから得られたホモジネートを処理できました。

分離結果

実験条件

(1) 遠心分離条件

(2) 使用チューブ : 40PAチューブ

(3) 試料調製法^*1)

• 1. buffer A：0.35Mソルビトール，50mM Tris-HCl（pH8.0），5mM EDTA （使用直前に0.1％（V/V）2－メルカプトエタノール，0.1％（W/V）BSAとなるように加える）
  2. buffer B：0.35Mソルビトール，50mM Tris-HCl（pH8.0），25mM EDTA
  3. 勾配液 1：30％（W/W）ショ糖，50mM Tris-HCl（pH8.0），25mM EDTA
  4. 勾配液 2：52％（W/W）ショ糖，50mM Tris-HCl（pH8.0），25mM EDTA

  

（参考文献）

1. METHODS IN ENZYMOLOGY，118，167-186（1986）．